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试玩版的剧情设在吉儿帮助 U.B.C.S.一行重新启动地铁的初期阶段，主线任务非常简单：前往地铁控制室（Subway Office），拿到消防水带（Fire Hose），回到着火的小巷灭火并前进少许，Demo 便会随着追迹者（Nemesis）的破墙而出宣告结束。速攻的话 3 分钟内即可打完。
玩家还可以尝试完成 2 个支线：
试玩版中可以使用的武器如下。
配件方面只有手枪 G19 用的红点瞄准器（Dot Light），组装后可增加红外线瞄准功能，并加快准星缩圈速度。
此外弹药粉的组合规律如下：
《RE:3》的基本操作与《RE:2》类似，唯一的区别是引入了回避系统。以 PS4 版系统默认键位为例，按 R1 键即可做出闪避动作（但无法取消上弹硬直），连续发动 3 次会有一个大硬直，千万要注意。普通闪避是没有无敌时间的，唯有在敌人攻击命中的瞬间发动“即时闪避”（画面上会出现特效），吉儿做出翻滚的闪避动作时才有较长的无敌时间。在此期间举枪，主角还会自动锁定敌人的弱点——这是强化本作动作性的核心系统。
为了突出回避系统，本作中匕首和手雷不再像《RE:2》那样有“护身武器”的功能。由于吉儿的挥刀动作是向前突刺的，这也导致《RE:3》的刀不像《RE:2》那么 imba。不过匕首近战也追加了两个细节：①在出刀的同时左摇杆推←↓→任一方向，吉儿会在突刺过后做出一个后撤步的动作；②成功发动即时闪避后举刀，能使出特殊的出刀动作——从下向上划。
与《RE:2》类似，本作在举枪瞄准时也有准星缩圈的系统（霰弹枪无效）。当准星缩到最小时能提升射击精度、攻击威力和暴击率。一旦开枪或移动，准星就又会变大。此外，开枪触发暴击时也追加了画面特效，非常酷炫。
在部分场景里摆放着红色的油桶以及冒着火花的电箱。用枪射爆油桶能够形成范围伤害，这也是《生化3》原版旧有的要素。攻击电箱则会让一定范围内的敌人陷入较长时间的硬直，很适合用来摆脱追迹者的纠缠。而且电箱在经过一段时间的充电后可以再度使用。
Demo 中触发追迹者登场的关键动作是玩家从地铁控制室捡起消防水管，回程时开启甜甜圈店大门便会狭路相逢（另一条路小屋 2 楼的门会被丧尸强制堵上无法开启）。因此，想要尽情探索、完成支线或收集，就不要急着捡水管。
追迹者登场后，会在一定范围内紧追玩家，动作非常迅速，但无法进入安全屋。投掷手雷、引爆油桶都可以直接把追迹者打跪，但在 Demo 中它不会掉落配件或补给物资。一旦靠近需要灭火的小巷，它就会优先离场。另外体验版中还首次展现了“寄生丧尸”——由追迹者的触手吞噬丧尸头部后形成的新怪物。
试玩版里还特地安放了多达 20 个查理先生（Mr. Charlie）玩偶供玩家收集，与 7 代里的无所不在先生、2 代重制版里的浣熊先生类似。当附近有查理先生时，会听到“卡拉卡拉”的特殊音效声。玩家把账号与 RE.NET 联动，完成此项收集并上传数据，就能获得 100 点大使点数（Ambassador Point）。“生化危机大使计划”会不定期向玩家发放试玩和各种活动的参加资格，有时还有礼品相赠。
01：地铁车厢北侧，对面站台的地上。
02：地铁站内储物箱附近的桌上。
03：从地铁站半掩着的卷闸门离开时，前方街道的救护车上。
04：在着火的小巷外触发剧情后，摇栅栏的 3 只丧尸身后的车上。
05：甜甜圈店门外，楼梯边的脚手架下。
06：甜甜圈店内，柜台后的微波炉边。
07：超市内（需剪断锁链），收银台处背对着玩家。
08：有解谜保险柜的民房内，货架上层。
09：有解谜保险柜的民房楼群屋顶，变电箱上。
10：从有解谜保险柜的民房后门离开时，在正面高处的架子上。
11：从有解谜保险柜的民房后门离开时，在左侧的屋顶上。
12：药店内，大幅泳装海报右侧的货架上。
13：地铁控制室南侧的小巷（需剪断锁链），尽头尸体附近的阴影处。
14：地铁控制室拿霰弹枪的房间，门边柜子里。
15：地铁控制室南侧的小巷外，附近警车内的座椅上（需先完成特定条件）。想触发这个丧尸出门的事件，要在本次游戏过程中累计发动“即时闪避”25 次以上，靠近车门时丧尸就会跌出来。
16：超市外警车内的座椅上（需先完成特定条件）。与 15 类似，不过必须先让追迹者登场（即拿到消防水管），然后把追迹者打跪 3 次以上，靠近车门便会触发。最快打跪的方法为：①扔手榴弹，②引爆油桶。
17：着火小巷，灭火后在尽头的通风口上。位置比较阴险，灭火后贴着右侧的墙慢慢往前蹭的同时朝左看，一发现查理玩偶就果断掏枪射击，否则再往前就会触发结束 Demo 的剧情演出。
18：甜甜圈店正面的屋顶上（需先完成特定条件）。先在玩具店外隔着窗户，用枪瞄准店内墙上贴着的查理先生海报 10 秒以上（如图），甜甜圈店屋顶上才会刷出查理玩偶。
19：有解谜保险柜的民房楼群屋顶，胖丧尸的尸体边（需先完成特定条件）。玩家需要完成 2 个先制条件：①收集到 2 个“高级火药”（分别位于超市和药店），并组合出马格南弹药；②回地铁站找米海尔触发“清理碎石”的对话。此时再前往查理玩偶 09 所在的那个屋顶，原本被女丧尸啃食的胖尸体会发生莫名其妙地位移，移到了红色车辆附近（如图），而查理玩偶就在他身边。
20：药店内，大幅泳装海报左侧车辆撞进来的废墟处（需先完成特定条件）。触发灭火的剧情动画后原路返回，到玩具店门前着火的位置，在警车后能看到一个丧尸傻站在无法靠近的位置（如图），将其射杀后返回药店。在泳装海报边有车辆撞进来的位置，先前那个趴着的丧尸会复活，而其原本的位置就能看到最后一个查理玩偶。
